라이카 마이크로시스템의 새로운 다중컬러 TIRF는 모든 중요한 파장의 형광체를 여기하기위한 4개의 통합된 고체상레이저들을 all-in-one으로 제공합니다. 매우 짧은 스위치시간, 한 파장에서 다른 것으로 변환할 때 일정하게 자동으로 유지되는 TIRF투과깊이, 고도로 동기화된 영상기록속도 등은 살아있는 세포내의 동적인 과정을 연구하는 데에 새로운 지평을 열어줍니다.
주요 특징
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통합된 4개 레이저(405, 488, 561, 635nm)와 빠른 AOTF
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파장 전환시 투과두께의 보정
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TIRF와 빠른 FRET 분석의 조합
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최대 TIRF이미징 속도와 영상밝기를 위한 최고 투과도의 TIRF 옵틱
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파장 변환 동시에 30fps의 빠른 영상기록
세포막과 세포외환경을 연구하기 위한 이상적인 기술. TIRF는 전반사에서 생성된 evanescent field를 사용하여 형광체를 여기시킵니다. 여기광으로 시료전체를 비추는 일반 형광현미경술과 달리 evanescent field는 시료의 약 70-300nm의 깊이까지만 투과합니다. 시료의 더 깊은 부분의 형광체는 여기되지 않습니다. 이 방법은 실질적으로 향상된 SN비(신호 대 잡음 비)를 제공하여 매우 높은 영상품질을 가져옵니다. 4개의 AOTF로 조절되는 레이저라인이 라이카 TIRF시스템에 통합되어 있어 빠른 파장변환과 다양한 형광체로 고속영상기록이 가능합니다.
라이카 TIRF시스템은 동적인 스캐너를 갖추고 있어서 레이저 빔을 정확히 위치시키며 evanescent field의 정확한 투과두께를 정할수 있습니다. 강력한 라이카 LAS AF 형광소프트웨어는 TIRF 시스템을 완전히 통제합니다. 여기에는 모든 현미경기능과 많은 분석툴이 포함되어 있습니다.
세포막과 세포외환경을 연구하기 위한 이상적인 기술. TIRF는 전반사에서 생성된 evanescent field를 사용하여 형광체를 여기시킵니다. 여기광으로 시료전체를 비추는 일반 형광현미경술과 달리 evanescent field는 시료의 약 70-300nm의 깊이까지만 투과합니다. 시료의 더 깊은 부분의 형광체는 여기되지 않습니다. 이 방법은 실질적으로 향상된 SN비(신호 대 잡음 비)를 제공하여 매우 높은 영상품질을 가져옵니다. 4개의 AOTF로 조절되는 레이저라인이 라이카 TIRF시스템에 통합되어 있어 빠른 파장변환과 다양한 형광체로 고속영상기록이 가능합니다.
물질수송과정에 관련된 단백질과 수용체들의 연구, 세포막에서의 물질상호작용의 연구 등은 여기파장의 빠른 전환이 필요합니다. 라이카 다중컬러 TIRF시스템은 evanescent field 투과도의 변경없이 수 ms내에 여기파장이 전환됩니다. 시스템의 빠른 조절 및 초당 30프레임의 고속 영상기록속도는 FRET분석에 장점이 됩니다. 새로운 FRET위저드를 사용하여 실험을 쉽게 수행할 수 있고, 자동으로 완전히 평가할 수 있습니다. TIRF 모듈의 일반형광광로에서 잦은 레이저 파장 전환이 필요하면 라이카 외장형광필터휠이 사용될 수 있으며 약 30-50ms의 스위칭시간을 쉽게 얻을 수 있습니다.
라이카 TIRF 시스템으로 세포막에 가까운 단분자를 이미징하는 것은 쉽습니다. 전형적으로 강력한 대물렌즈의 Z축 분해능은 사용된 빛의 파장에 따라 약 400-500nm로 물리적으로 제한됩니다. 라이카의 민감한 TIRF시스템은 단분자의 상호작용, 분자의 동역학, colocalization을 가기화하고 측정합니다. 레이저라인을 전환하며 일정한 evanescent field투과깊이를 유지하는 것은 여러 형광체를 사용하는 필수적 사항입니다. 훌륭한 SN비(신호 대 잡음 비)는 고성능 카메라의 전 dynamic range를 다 사용할 수 있습니다. 심지어 약한 형광신호라도 EMCCD카메라는 최고해상도의 영상을 제공하면서 빛에 민감한 시료를 다룰 때 요구되는 민감도도 갖추고 있습니다.
강한 배경 형광 때문에 vesicle 수송연구는 최적의 SN비를 요구합니다. 동시에 수 시간 및 수 일동안의 안정된 실험은 필수사항입니다. 라이카 AM TIRF MC로 vesicle 수송실험을 간단히 이루어집니다. TIRF시스템에 대한 라이카 특수 챔버는 온도 및 CO2수준은 일정하게 유지합니다. 라이카 AF6000 다차원 형광워크스테이션은 지능적인 응용소프트웨어와 하드웨어를 제공하여 정확한 결과를 줍니다. Vesicle 수송연구의 밝은 사진을 위해 고감도 고속 EMCCD카메라가 사용됩니다.
라이카의 자동 얼라인먼트 기능은 자동으로 evanescent field 투과두께와 TIRF 각도의 상관성을 찾아 고정합니다. 통합된 TIRF 센서는 전반사를 감지하고 사용자가 쉽게 특정 투과두께로 설정하게끔 도와줍니다. Evanescent field 투과두께는 레이저 파장에 따라 달라지며 또한 커버슬립과 시료의 굴절율에 따라 달라집니다. 통합된 굴절계 기능은 자동으로 조사되는 시료의 굴절율을 자동으로 측정합니다. 지능적인 수학 알고리즘은 정확히 레이저파장, 굴정율 및 레이저 빔의 입사각을 바탕으로 TIRF의 투과두께를 계산합니다. 선택된 관찰법은 반드시 TIRF로서 레이저 일반형광과 동시에 이루어질 수는 없습니다. 사용자는 evanescent field의 가장 작은 투과두께에서 시료를 관찰하기 시작하여 좀 더 깊을 곳으로 들어갑니다. 투과두께는 관찰중인 시료의 구조와 방향에 따라 선택됩니다, 이런 식으로 가시화된 구조 및 현상의 위치가 세포막에 가까운 곳에서 정확히 확인됩니다.
/43B3AD087426C0D7C12572F7003619C8/$FILE/AM_TIRF_MC_pro_4_sg_s.jpg)
/E749EFB26DAACCF5C1257157002C0812/$FILE/AM_TIRF_pro_7_sg_s.jpg "TIRF Microscope System")
/DE11A79C4CCE5E33C12572F9004EB6E5/$FILE/AM_TIRF_MC_pro_8_sg_s.jpg "Leica AM TIRF MC – Visualize Life’s Secrets")
/5A7D93EF6BF1D61DC12572F70035FB28/$FILE/AM_TIRF_MC_pro_3_sg_s.jpg "Leica AM TIRF MC – Visualize Life’s Secrets")
/0A97B8263924C83AC12572F70036AE41/$FILE/AM_TIRF_MC_pro_7_sg_s.jpg "Leica AM TIRF MC – Visualize Life’s Secrets")
/E68362E70A48E71EC12572F70035BC59/$FILE/AM_TIRF_MC_pro_1_sg_s.jpg "Leica AM TIRF MC – Visualize Life’s Secrets")
/A3368E54E955E4A2C12572F90050544C/$FILE/AM_TIRF_MC_pro_9_sg_s.jpg "Light path of the Leica TIRF module. The laser beam is positioned in the objective with the aid of a scanner. The returning
beam of the total reflection is measured on a special sensor. This feedback allows precise, fully automatic, and reproducible setting of the penetration depth of the generated evanescent field.")
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